home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9604b.zip / M9640690.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-03-04  |  2KB  |  37 lines
  1.        Document 0690
  2.  DOCN  M9640690
  3.  TI    Stable transfection of cloned murine T helper cells.
  4.  DT    9604
  5.  AU    Will A; Rollinghoff M; Gessner A; Institut fur Klinische Mikrobiologie
  6.        und Immunologie,; Universitat Erlangen-Nurberg, Erlangen, Germany.
  7.  SO    J Immunol Methods. 1995 Dec 15;188(1):139-46. Unique Identifier :
  8.        AIDSLINE MED/96140789
  9.  AB    Here we describe a protocol for the stable transfection of murine T
  10.        helper (Th) cells and long term culture of the resulting transfectants.
  11.        The electroporation protocol was established for the murine Th2 clone
  12.        L1/1 by testing different parameters determining the electric field
  13.        (capacitance, voltage, single or twin pulse) as well as the activation
  14.        status of the cells. The transfected T cells were genetically altered by
  15.        stable integration of the neomycin resistance gene, encoded in the
  16.        vector pM5neo, into the genome. For selection and long term culture of
  17.        stable transfectants a scheme combining selection with the antibiotic
  18.        neomycin (G-418, Geneticin) and repeated stimulation with antigen
  19.        presenting cells (APC) and antigen was established. This protocol should
  20.        also be applicable to other antigen reactive T cells. The resistance of
  21.        the T cells to neomycin correlated directly with expression of the
  22.        transferred neomycin resistance gene as demonstrated by mRNA analysis.
  23.        Applying periodic reselection with neomycin the transfected Th2 cells
  24.        were found to be stable for more than 18 months in culture and displayed
  25.        an unaltered antigen recognition and lymphokine production pattern as
  26.        compared with the untransfected L1/1 Th2 cells.
  27.  DE    Animal  Antigen-Presenting Cells/IMMUNOLOGY/METABOLISM  Base Sequence
  28.        Cell Line  Clone Cells/IMMUNOLOGY  Electroporation  Female
  29.        Genes/IMMUNOLOGY  Lymphocyte Transformation/GENETICS  Mice  Mice, Inbred
  30.        BALB C  Molecular Sequence Data  Support, Non-U.S. Gov't  Th2
  31.        Cells/IMMUNOLOGY/*METABOLISM  Transfection/GENETICS/*METHODS  JOURNAL
  32.        ARTICLE
  33.  
  34.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  35.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  36.  
  37.